@MicrobioGirl حضرت دورة تدريبيه في طرق حفظ المزارع الميكروبية واحدى الطرق هذه الطريقه الحفظ بالجليسرول ،، لخصتي الطريقه ما شاء الله في نقاط يسهل لأي قارئ استيعابها ،، جزاك الله خير ونفع الله بك وجعلها الله في ميزان حسناتك
#مايكروبيولجي بحثك كله عزلات كائنات دقيقة وتبغى تحفظها عشان تكمل بقية التجارب اللاحقة (تعريف، اختبار حساسية، اختبارات أخرى)
كتبت لك الخطوات بالتفصيل ومن قلب المعركة🧫
يمثل الحفظ بالتجميد العميق باستخدام الجليسرول خطوة أساسية لضمان استمرار حيوية العزولات الميكروبية (البكتيرية والخمائر) لفترات زمنية طويلة.
يعمل الجليسرول كعامل حماية قوي (Cryoprotectant) يمنع تكوّن البلورات الثلجية الحادة داخل الخلايا أثناء الانخفاض الشديد في درجات الحرارة، مما يحافظ على استقرار العينة الفسيولوجي والجيني استعداداً للاختبارات والأبحاث المستقبلية.
1.أفضل الأوساط الزراعية السائلة (Broth) وطريقة التحضين، تختلف متطلبات النمو باختلاف الكائن الدقيق المستهدف:
للبكتيريا: نستخدم أوساطاً غنية مثل Tryptic Soy Broth (TSB) أو Brain Heart Infusion (BHI). نلقح الأنبوب السائل بمستعمرة بكتيرية نقية ونحضنه في الحضانة (غالباً عند 37 درجة مئوية لمدة 18-24 ساعة).
للخمائر: نستخدم أوساطاً مخصصة لنمو الفطريات والخمائر مثل Yeast Extract Peptone Dextrose (YPD) Broth أو Sabouraud Dextrose Broth (SDB). نلقح الأنبوب بمستعمرة خميرة نقية ونحضنه (بين 25 إلى 30 درجة مئوية للأنواع البيئية، و 37 درجة مئوية للأنواع الممرضة) لمدة تتراوح بين 24 إلى 48 ساعة.
في كلتا الحالتين، نستمر في التحضين حتى نلاحظ تعكراً واضحاً وكثيفاً للسائل. يؤكد هذا التعكر وصول الميكروب لمرح��ة النمو الطوري النشط (Log phase)، حيث تمثل الكثافة الخلوية العالية شرطاً أساسياً لنجاح عملية التجميد.
2.خطوات العمل المعملي:
🔹 حَضِّر محلول ��ليسرول بتركيز 50% عبر خلط 10 مل من الجليسرول النقي مع 10 مل من الماء المقطر. عَقِّم المحلول بجهاز الموصدة (Autoclave) واتركه يبرد تماماً.
🔹 اسحَب 500 ميكرولتر من محلول الجليسرول المعقم وانقلها إلى أنبوب الحفظ (Cryovial).
🔹 اسحَب 500 ميكرولتر من المعلق الميكروبي (الوسط السائل المُحضّن للبكتيريا أو الخميرة) باستخدام الماصة الدقيقة؛ اضبط القراءة على 050 في ماصة P1000 لضمان دقة الحجم.
🔹 انقُل العينة الميكروبية المسحوبة إلى نفس أنبوب الحفظ الذي أضفت إليه الجليسرول للتو، ليصبح الحجم الإجمالي 1000 ميكرولتر (1 مل).
🔹 أغلق غطاء الأنبوب بإحكام شديد لتجنب التلوث.
🔹 ضَع الأنبوب على جها�� الخلط الاهتزازي (Vortex) لعدة ثوانٍ لضمان تجانس الخلايا مع الجليسرول بالكامل.
🔹 رَتِّب الأنابيب داخل صناديق التجميد المقسمة (Cryoboxes) وسجل بيانات العزلة بوضوح.
🔹 احفَظ الصناديق مباشرة في ثلاجة التجميد العميق عند درجة حرارة 80- مئوية لضمان استقرار العينة.
من أكثر الأشياء التي تجعلك في تصالح دائم مع نفسك، هو أن تظل محايداً في توقعاتك من البشر؛ فلا ترجو خيراً ولا تترقب شراً. فإن أتاك منهم خيرٌ استبشرت، وإن غاب، وقيت قلبك مرارة الخيبة وألم التأسف.