In #DNA_Day!
تعالوا نتكلم شوي كيف نختار الـ Master Mix المناسب لتجارب الـ PCR 👇🏼
زمان لما كنت طالبة، كنت أحتار كثير بين أنواع الـ Master Mix وما أعرف أيهم الأنسب لتجربتي بس بعد ما توظفت في @HavenSci صرت أقدر أفرق بينهم بسهولة وأقدر الخص لكم الأنواع الاساسية. واكيد في أنواع ثانية بس لازم كل معمل عنده هذي الانواع لأنها تفي بالغرض 👌🏼
🔬أولاً: ايش هو الـ Master Mix؟
هو الخليط الأساسي في تفاعل الـ PCR، يحتوي على إنزيم تضخيم الحمض النووي (DNA Polymerase) بالإضافة لمكونات تساعد على تحسين كفاءة التفاعل. اختيار النوع المناسب وجودته العالية = نتائج نظيفة وواضحة.
✨ أنواع الـ Master Mix الأساسية لـ Traditional PCR
1️⃣ Hot Start Master Mix (الأساسي)
هذا هو النوع التقليدي المستخدم في الـ PCR العادي. وظيفته تضخيم الجين المطلوب، وبعدها نكشف عن النتيجة باستخدام الجل. بعد كذا تطور الـ Master Mix وصارت تُضاف له صبغات جاهزة، بحيث نقدر نشوف نواتج الـ DNA مباشرة على الجل بدون الحاجة لإضافة صبغة بعد خطوة الـ PCR، وهذا يوفر وقت وجهد أثناء العمل 👌🏼
لكن هذا النوع ما يُفضّل استخدامه إذا كان الهدف من التفاعل هو تطبيقات لاحقة مثل الـ sequencing أو غيرها، لأن الصبغة المضافة قد تتداخل مع مكونات الكِتات الأخرى وتؤثر على دقة النتائج.
2️⃣ Hot Start Ready-to-Load
نفس الفكرة السابقة لكن يحتوي على صبغة جاهزة، يعني يوفر علينا خطوة إضافة الصبغة بعد الـ PCR
وطبعاً بما ان ال PCR العادي تطور وصار له انواع لازم يكون فيه ماستر مكس جديدة تناسب real time PCR , هذا النوع من الجهاز تطور عشان يسهل على الباحثين يتأكدون من نتيجة تضخم الحمض النووي بدون ما يشوفونه على الجل , بحيث يعطينا إذا حصل التضخيم وكم كميته ومتى بدأ ايضاً مباشرة! ويعتمد على نوعين أساسين وهما:
3️⃣ Dye-Based Master Mix (مثل SYBR/EverGreen)
غالباً يستخدم لما يكون الهدف من التجربة هو معرفة ما اذا تم تضخيم الجين المستهدف ام لأ , يعتمد على صبغة ترتبط بالـ DNA، ويقيس الجهاز الاشعاع الصادر منها مباشرة.
4️⃣ Probe-Based Master Mix
أدق في عملية التضخم ويعطينا نتائج موكدة وغالبا يستخدم في التشخيص او اذا عندي تجربة ابغى اكشف عن جين معين بدقة عالية واكون متأكدة ان الجين اللي تضاعف هو الجين المستهدف, هل هذا يعني ان كلٌ الأنواع السابقة للماستر مكس اللي قبل ماراح تكون النتائج دقيقة ؟ الجواب لأ لان الاصل انها تكون دقيقة إذا كانت كُل المعطيات صحيحة، ولكن في حالة الخصوصية العالية والتشخيص نحتاج عامل اضافي ياكد لنا ١٠٠٪ وهو هذا ( Probe) عبارة عن تسلسل حمض نووي قصير يرتبط بالجين وماراح يعطي إشارة الا اذا ارتبط بالجين الصحيح.
🧪 طيب لو العينة RNA؟ بما إنه ما فيه إنزيم يضخم RNA مباشرة، لازم نحوله أولاً إلى DNA
🔹 الطريقة الأولى:
استخدام cDNA synthesis kit (إنزيم النسخ العكسي) ثم نكمل بـ Master Mix عادية
🔹 الطريقة الثانية:
استخدام One-Step Master Mix
يسوي التحويل + التضخيم في نفس الأنبوب 👌🏼
(متوفر للـ PCR العادي و الـ qPCR)
الشيء الجميل والمميز ان كُل هذا عندنا بشركة هيفن داخل السعودية تصنع بجودة عالية وسعر جيد ومتاح الطلب لها في أي وقت وتوصل بشكل أسرع! من خلال الرابط!
🔗 https://t.co/cYLvTPCsfw
#PCR #Primers #DiagnosticKits #HavenScientific #MolecularBiology
بكتيريا السالمونيلا Samonella typhimurim والتي تسبب تسمم غذائي Food poisoning من الممكن استخدامها لعلاج السرطان بعد تعديلها وراثياً بحيث تهاجم الخلايا السرطانية وبدون أن تؤثر على الأنسجة السليمة.
https://t.co/R5h43URnd9