When it was discovered, there was a paradigm that said that OPN4 was expressed exclusively in ganglion cells in mammals. Other researchers and us have been finding it in other places where "it shouldn't be", which leads to the question of what is its function outside the retina?
@adrisanmld@LatinXChem Hi Adri, could you tell me what would be the most relevant conclusion and contribution of the work from the very interesting results you presented?
(2/2) Esto tambien parece variar dependiendo de la región de la retina, ya que tenemos cortes en donde hay muchísimas células con OPN4, y otros en donde solo hay una o dos células marcadas. Mi tesis se centra en hacer esta descripcion detallada, pero apenas vamos comenzando
@adrisanmld@LatinXChem Muy buen trabajo. Con respecto a la primer figura cuando observas en rojo presencia de ARNm es en general o haces referencia al ARNm de melanopsina? si es el ARN de la melanopsina como explicas la diferencia de distribución de señal en las diferentes capas de la retina?
Hemos encontrado indicios que no solo las celulas ganglionares expresan melanopsina, tambien hemos encontrado células amácrinas, y células ganglionares "desplazadas" cuyo soma se encuentra en la capa nuclear interna. (1/2)
@adrisanmld@LatinXChem Muy buen trabajo. Con respecto a la primer figura cuando observas en rojo presencia de ARNm es en general o haces referencia al ARNm de melanopsina? si es el ARN de la melanopsina como explicas la diferencia de distribución de señal en las diferentes capas de la retina?
2/2 y tambien existen células "desplazadas" cuyo soma celular se encuentra en otro lugar diferente sl resto. Por lo que usamos un fluoróforo para la sonda y otro para el marcador celular (anticuerpos) que queramos observar
@adrisanmld@LatinXChem Muy bueno, mi pregunta es ¿Que tipo de cambio conformacional sufre la melanopsina antes de empezar el proceso de señalización y porque el el fluoro ALEXA 594 que se excita entre 561 y 594nm fue la elección a unir a una secuencia de RNAm?
También hemos unido la sonda a Alexa 498. Estamos usandola en conjunto con anticuerpos marcados con fluoróforo de otro color para identificar el tipo de células que lo estan expresando. En la capa nuclear interna coexisten diversos tipos celulares 1/2
@adrisanmld@LatinXChem Muy bueno, mi pregunta es ¿Que tipo de cambio conformacional sufre la melanopsina antes de empezar el proceso de señalización y porque el el fluoro ALEXA 594 que se excita entre 561 y 594nm fue la elección a unir a una secuencia de RNAm?
Si hubieran anticuerpos que reconocieran la porción extracelular probablemente se podría hacer in-vivo, pero los anticuerpos comerciales de raton reconocen la porción intracelular, por lo que debes darle algún tratamiento a la célula para que éste pueda entrar
Únicamente hemos utilizado este proceso ex-vivo, ya que la sonda hibrida con el ARNm en el citosol y necesitamos que las membranas sean permeables, por lo que no estoy segura de que esta técnica funcione in-vivo.
Cuando el 11-cis-retinal es excitado este cambia a todo-trans retinal. Esto provoca un cambio en la porción intracelular unida a una proteína G, la cual es la encargada de continuar esta señalización. La OPN4 todavía no ha sido cristalizada asi que no hay fotos de este cambio
@adrisanmld@LatinXChem Muy bueno, mi pregunta es ¿Que tipo de cambio conformacional sufre la melanopsina antes de empezar el proceso de señalización y porque el el fluoro ALEXA 594 que se excita entre 561 y 594nm fue la elección a unir a una secuencia de RNAm?
Si! La melanopsina lleva a cabo el mismo proceso, cis-11-retinal sufre un cambio morfológico el cual inicia una cascada de señalización en la neurona que terminará por despolarizar la membrana, se dispara un potencial de acción y se liberen neurotransmisores en la sinapsis
@adrisanmld@LatinXChem Buen día, tengo entendido que la rodopsina esta compuesta por cis-11-retinal, en humanos cuando esta absorve la luz se convierte en un isómero trans y genera una imagen, ¿Pasa lo mismo en la retina de los conejos?
Hello everyone at @LatinXChem, I am happy to share with you my work "Sonda ARNm de melanopsina en retina de conejo", which is an ongoing investigation. I am excited to answer any questions you might have! #LatinXChem#LatinXChem2021#LXChemBio#BIO055. Have a great day!
@adrisanmld, your poster submitted to #LatinXChem2021 has been accepted for presentation in the #LXChemBio category. After the deadline, we'll let you know the registration number and further details. See you on Sept 20!